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  • HyperScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit with gDNA Remover
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HyperScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit with gDNA Remover

货号:R201
产品详情
货号
规格价格保存条件
R201-01
50 rxns(20μL体系)RMB 950 749
-20℃长期保存
R201-02100 rxns(20μL体系)RMB 1800 1250

产品介绍

    本品为以RNA为模板合成1st Strand cDNA 的试剂盒,包含gDNA去除和逆转录两个部分。通过使用不同的逆转录引物本试剂盒既可以合成全长cDNA用于克隆,又可以合成高度均一的cDNA用于qPCR定量。gDNA remover可以快速去除RNA样本中残留的基因组DNA,而其活性被随后加入组分抑制,保证了新合成的cDNA不被降解。试剂盒所使用的逆转录酶是基于M-MLV定向进化而来的新一代逆转录酶,具有更低的RNase H活性、更高的热稳定性和cDNA合成效率,搭配为其优化的最适buffer,可以获得15k以上的全长cDNA。

产品组成

image.png

温馨提示

    5x RT Mix 若出现白色沉淀,请颠倒混匀确保沉淀完全溶解后使用。

    为保证实验成功率和准确性,请勿使用过度降解的RNA。

    配置反应液时,请使用RNase-free枪头、Microtube等。

    若后续为定量PCR(qPCR),逆转录15 min;若后续为克隆实验,逆转录45 min。

产品使用

    1.RNA热变形(可选,5kb以上片段克隆为必须步骤)

    请配置如下反应液:

图片.png

    70℃处理5min后立即冰浴2min。

    注:热变性处理RNA,可以打开RNA的高级结构,有利于后续逆转录反应。若后续实验为PCR,且目的片段大于5k,不可省略该步骤。如果加入的为mRNA:10 pg - 500 ng。

    2.gDNA去除体系配置及反应程序

    若选择步骤1,在上述混合液中加入2 μL 5 × gDNA remover 混匀后42℃ 2min;

    若省略步骤1,请配置如下反应液,混匀后42℃ 2 min。
图片.png

    3.配置逆转录反应体系

    请配置如下反应液:

图片.png

    注:1. 后续实验为克隆实验,若RNA来源于真核生物,只需使用Oligo (dT)20VN即可,加入Random Primers会降低全长cDNA的产量;

               若RNA来源于原核生物,只需使用Random Primers 或基因特异性引物(2pmol)。

           2. 后续实验为qPCR,请同时加入Oligo(dT)20VN和Random Primers以获得在mRNA不同位置逆转录效率均一的cDNA。

    4.逆转录反应程序

        请按如下条件进行逆转录反应:

图片.png

        注:1. 25℃ 5min有助于Random Primers与RNA结合,若不使用Random Primers该步骤可省略。

               2. 若后续实验为克隆实验,逆转录45min即可产生最大量的全长cDNA;若后续实验为qPCR,逆转录15min即可。

               3. HyperScriptTM III 在37-60℃均有较强活性,37℃即可满足绝大多数实验;若目标RNA区域有高GC部分,可提高逆转录温度至50℃。

               4. 85℃ 5s 可以失活逆转录酶和gDNA remover,请勿省略该步骤。

        逆转录产物可直接用于下游实验,也可置于4℃短暂放置,3-6个月内-20℃保存,长期存放请置于-80℃冰箱,cDNA小份分装避免反复冻融。

常见问题及解决方案:

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HyperScriptTM III 1st Strand cDNA Synthesis Kit with gDNA Remover产品说明(R201).pdf


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