Cas9 Nuclease with NLS(20μM )

产品介绍

    Cas9 Nuclease with NLS是N端和C端都带有核定位信号的RNA导向的序列特异性双链DNA内切酶。本品是大肠杆菌表达纯化的超高纯度的Cas9活性蛋白。

产品组成

产品特点

    体外基因编辑

    体内基因编辑

产品使用

    A.体外基因编辑

    为了保证切割效率，Cas9 Nuclease和sgRNA、target DNA的摩尔比例至少为10:10:1或者更高。实验前用无核酸酶的水稀释sgRNA到0.9 μM,同时用无核酸酶的水稀释DNA到0.09 nM，同时用无核酸酶的水稀释DNA到0.09 μM。过程中使用的耗材和试剂都请使用无核酸酶级别，防止引入RNA酶。

    1.请在冰上配置以下体系：

    2. 37℃孵育10分钟。

    3. 加入 7 μL 0.09 nM的DNA。移液枪轻轻吹打混匀。

    4. 37℃孵育60分钟。

    5. 产物直接用于琼脂糖检测。用于下游实验。

    B.体内基因编辑

    1.请在冰上配置以下体系：

    sgRNA可用 nuclease-free 水稀释，Cas9 Nucleas with NLS可用Reaction Buffer 稀释。

    2. 轻轻混匀，室温25℃孵育10分钟。

    3. 室温下配置以下体系：

    4. 轻轻混匀，室温25℃孵育20分钟。

    5. 取25 μL步骤3的混合物到96孔板的单孔里面，再取125 μL细胞（32万/mL）。上下左右轻轻晃动96孔板混匀。

    6. 细胞培养48 - 72小时。

    7.T7内切酶检测编辑效率（参照T7内切酶说明书）。

    C.体内基因编辑

    电转实验请参照相应电转仪说明，电转实验比Lipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent效果更好。

Cas9 Nuclease with NLS产品说明（C102）.pdf