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HyperScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit

货号:R101
产品详情
货号
      规格价格保存条件
R101-01
50 rxns(20μL体系)RMB 900 599
-20℃长期储存
R101-02100 rxns(20μL体系)RMB 1700 1150

产品介绍

本品为以RNA为模板合成1st Strand cDNA 的试剂盒。通过使用不同的逆转录引物本试剂盒既可以合成全长cDNA用于克隆,又可以合成高度均一的cDNA用于qPCR定量。试剂盒所使用的逆转录酶是基于M-MLV定向进化而来的新一代逆转录酶,具有更低的RNase H活性、更高的热稳定性和cDNA合成效率,搭配为其优化的最适buffer,可以获得15k以上的全长cDNA。

产品组成

图片.png

温馨提示

5x RT Mix 若出现白色沉淀,请颠倒混匀确保沉淀完全溶解后使用;

为保证实验成功率和准确性,请勿使用过度降解的RNA;

配置反应液时,请使用RNase-free枪头、Microtube等;

若后续为定量PCR(qPCR),逆转录15 min;若后续为克隆实验,逆转录45 min。

产品使用

1.配置逆转录反应体系

请配置如下反应液:

图片.png

注:

1. 后续实验为克隆实验,若RNA来源于真核生物,只需使用Oligo (dT)20VN即可,加入Random Primers会降低全长cDNA的产量;若RNA来源于原核生物,只需使用Random Primers 或基因特异性引物(2pmol)。

2. 后续实验为qPCR,请同时加入Oligo(dT)20VN和Random Primers以获得在mRNA不同位置逆转录效率均一的cDNA。

3. 如果使用纯化后的mRNA,加入的量10 pg - 500 ng。

2.逆转录反应程序

请按如下条件进行逆转录反应:

 图片.png

 注:

1. 25℃ 5min有助于Random Primers与RNA结合,若不使用Random Primers该步骤可省略。

2. 若后续实验为克隆实验,逆转录45min即可产生最大量的全长cDNA;若后续实验为qPCR,逆转录15min即可。

3. HyperScriptTM III 在37-60℃均有较强活性,37℃即可满足绝大多数实验;若目标RNA区域有高GC部分,可提高逆转录温度至50℃。

4. 85℃ 5s 可以失活逆转录酶和gDNA remover,请勿省略该步骤。逆转录产物可直接用于下游实验,也可置于4℃短暂放置,3-6个月内-20℃保存,长期存放请置于-80℃冰箱,cDNA小份分装避免反复冻融。

逆转录产物可直接用于下游实验,也可置于4℃短暂放置,3-6个月内-20℃保存,长期存放请置于-80℃冰箱,cDNA小份分装避免反复冻融。

常见问题及解决方案

图片.png


产品说明书:

HyperScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit产品说明(R101).pdf


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