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Fast T4 DNA Ligase                                               

货    　号：B102

保存条件：- 20 ℃

产品介绍：

本品中的Fast T4 DNA Ligase能催化dsDNA或者RNA的5'- 磷酸末端和3'-羟基形成磷酸二酯键，该酶催化平滑末端或粘性末端DNA的连接，修复双链DNA，RNA，DNA/RNA 杂交链中的单链切口。本品中Fast T4 DNA Ligase和2 × Fast Reaction Buffer 经过了精心优化，能实现室温下5分钟快速连接反应。

产品组成：

产品使用：

A.粘性末端连接/平末端连接

2× Fast Reaction Buffer请混匀放置冰上备用，按照以下顺序加样，并使用移液器轻柔混匀：

※   线性化载体pmol = [( X ng ÷ 长度 ) × 1.5] 。

   例如 100ng 的5000 bp载体pmol = [(100 ng ÷ 5000 bp）× 1.5 ]= 0.03 pmol。

§插入片段ng = [(插入片段长度 ÷ 载体长度)× 载体的ng ×   摩尔倍数1-5]。

   例如800 bp片段插入5000 bp载体，线性化载体量为100 ng，插入片段ng = [(800 bp ÷ 5000 bp) × 100 ng ×   5倍] =80 ng。

B.连接反应条件

室温(25℃) 孵育5分钟，反应后-20℃存储或者放置冰上用于转化。

C.连接产物转化（使用化学感受态可参照以下步骤，或以使用的感受态说明书为准）

C.1   在冰上解冻克隆感受态细胞,取10 μl连接产物加入到100 μl感受态细胞中，轻弹管壁混匀，冰上静置30 min(连接产物不要超过感受态          体积的1/10)。

C.2   42℃水浴热激45秒，立即冰上冷却2-3分钟。加900 μl SOC或LB培养基(不添加抗生素)，37℃摇菌1小时(转速200 - 250 rpm)。

C.3   将相应抗性的LB平板固体培养基在37℃培养箱中预热。5,000 rpm离心5 min，弃掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无               菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。

C.4   37℃培养箱中倒置培养12-16 h。

本品仅供科研使用，不能用于人和动物医疗诊断