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HyperScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit

货号 R101-02
规格 100 次 / 20μL体系
简介 逆转录Kit
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说明书下载


HyperScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit                                         

货    号:R101


保存条件:- 20 ℃长期储存


产品介绍:

本品为以RNA为模板合成1st Strand cDNA 的试剂盒。通过使用不同的逆转录引物本试剂盒既可以合成全长cDNA用于克隆,又可以合成高度均一的cDNA用于qPCR定量。试剂盒所使用的逆转录酶是基于M-MLV定向进化而来的新一代逆转录酶,具有更低的RNase H活性、更高的热稳定性和cDNA合成效率,搭配为其优化的最适buffer,可以获得15k以上的全长cDNA。


产品组成:

               

组分R101-02 (100个反应)
15 × HyperScript Buffer400 μL
HyperScript III Enzyme Mix200 μL
Oligo (dT)20VN100 μL
Random Primers100 μL
RNase-free ddH2O1.5 mL


温馨提示:

·5 × HyperScript Buffer 若出现白色沉淀,请颠倒混匀确保沉淀完全溶解后使用。

·为保证实验成功率和准确性,请勿使用过度降解的RNA。

·配置反应液时,请使用RNase-free枪头、Microtube等。

·若后续为定量PCR(qPCR),逆转录15 min;若后续为克隆实验,逆转录45 min。


产品使用:

1.配置逆转录反应体系

请配置如下反应液:


真核生物mRNA
后续为克隆全长
真核生物mRNA
后续为qPCR
原核生物RNA使用基因
特异性引物
步骤2反应液10 μL10 μL10 μL10 μL
5 × HyperScript Buffer4 μL4 μL4 μL4 μL
HyperScript III Enzyme Mix2 μL2 μL2 μL2 μL
Oligo (dT)20VN*1 μL1 μL//
Random Primers*/1 μL1 μL/
Gene Specific Primers*///2 pmol(1μM,2 μL)
RNase-free ddH2O补足至20 μL补足至20 μL补足至20 μL补足至20 μL

注:1. 后续实验为克隆实验,若RNA来源于真核生物,只需使用Oligo (dT)20VN即可,加入Random Primers会降低全长cDNA的产量;若RNA来源于原核生物,只需使用Random Primers 或基因特异性引物(2pmol)。

    2. 后续实验为qPCR,请同时加入Oligo(dT)20VN和Random Primers以获得在mRNA不同位置逆转录效率均一的cDNA。

    3. 如果使用纯化后的mRNA,加入的量10 pg - 500 ng。


2.逆转录反应程序

请按如下条件进行逆转录反应:

4.png

注:1. 25℃ 5min有助于Random Primers与RNA结合,若不使用Random Primers该步骤可省略。

       2. 若后续实验为克隆实验,逆转录45min即可产生最大量的全长cDNA;若后续实验为qPCR,逆转录15min即可。

       3. HyperScriptTM III 在37-60℃均有较强活性,37℃即可满足绝大多数实验;若目标RNA区域有高GC部分,可提高逆转录温度至50℃。

       4. 85℃ 5s 可以失活逆转录酶和gDNA remover,请勿省略该步骤。逆转录产物可直接用于下游实验,也可置于4℃短暂放置,3-6个月内-20℃保存,长期存放请置于-80℃冰箱,cDNA小份分装避免反复冻融。

逆转录产物可直接用于下游实验,也可置于4℃短暂放置,3-6个月内-20℃保存,长期存放请置于-80℃冰箱,cDNA小份分装避免反复冻融。


常见问题及解决方案:

5.png



本品仅供科研使用,不能用于人和动物医疗诊断