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HyperScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit
货 号：R101
保存条件：- 20 ℃长期储存
产品介绍：
本品为以RNA为模板合成1st Strand cDNA 的试剂盒。通过使用不同的逆转录引物本试剂盒既可以合成全长cDNA用于克隆，又可以合成高度均一的cDNA用于qPCR定量。试剂盒所使用的逆转录酶是基于M-MLV定向进化而来的新一代逆转录酶，具有更低的RNase H活性、更高的热稳定性和cDNA合成效率，搭配为其优化的最适buffer，可以获得15k以上的全长cDNA。
产品组成：
| 组分 | R101-02 (100个反应) |
| 5 × HyperScript Buffer | 400 μL |
| HyperScript III Enzyme Mix | 200 μL |
| Oligo (dT)20VN | 100 μL |
| Random Primers | 100 μL |
| RNase-free ddH2O | 1.5 mL |
温馨提示：
·5 × HyperScript Buffer 若出现白色沉淀，请颠倒混匀确保沉淀完全溶解后使用。
·为保证实验成功率和准确性，请勿使用过度降解的RNA。
·配置反应液时，请使用RNase-free枪头、Microtube等。
·若后续为定量PCR(qPCR)，逆转录15 min；若后续为克隆实验，逆转录45 min。
产品使用：
1.配置逆转录反应体系
请配置如下反应液：
| 真核生物mRNA
后续为克隆全长 | 真核生物mRNA
后续为qPCR | 原核生物RNA | 使用基因
特异性引物 |
| 步骤2反应液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 5 × HyperScript Buffer | 4 μL | 4 μL | 4 μL | 4 μL |
| HyperScript III Enzyme Mix | 2 μL | 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| Oligo (dT)20VN* | 1 μL | 1 μL | / | / |
| Random Primers* | / | 1 μL | 1 μL | / |
| Gene Specific Primers* | / | / | / | 2 pmol(1μM,2 μL) |
| RNase-free ddH2O | 补足至20 μL | 补足至20 μL | 补足至20 μL | 补足至20 μL |
注：1. 后续实验为克隆实验，若RNA来源于真核生物，只需使用Oligo (dT)20VN即可，加入Random Primers会降低全长cDNA的产量；若RNA来源于原核生物，只需使用Random Primers 或基因特异性引物(2pmol)。
2. 后续实验为qPCR，请同时加入Oligo(dT)20VN和Random Primers以获得在mRNA不同位置逆转录效率均一的cDNA。
3. 如果使用纯化后的mRNA，加入的量10 pg - 500 ng。
2.逆转录反应程序
请按如下条件进行逆转录反应：
注：1. 25℃ 5min有助于Random Primers与RNA结合，若不使用Random Primers该步骤可省略。
2. 若后续实验为克隆实验，逆转录45min即可产生最大量的全长cDNA；若后续实验为qPCR，逆转录15min即可。
3. HyperScriptTM III 在37-60℃均有较强活性，37℃即可满足绝大多数实验；若目标RNA区域有高GC部分，可提高逆转录温度至50℃。
4. 85℃ 5s 可以失活逆转录酶和gDNA remover，请勿省略该步骤。逆转录产物可直接用于下游实验，也可置于4℃短暂放置，3-6个月内-20℃保存，长期存放请置于-80℃冰箱，cDNA小份分装避免反复冻融。
逆转录产物可直接用于下游实验，也可置于4℃短暂放置，3-6个月内-20℃保存，长期存放请置于-80℃冰箱，cDNA小份分装避免反复冻融。
常见问题及解决方案：
本品仅供科研使用，不能用于人和动物医疗诊断
