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EasyZol Reagent
货 号：TQ102
保存条件：室温保存(2~8°C更佳）
重要提示：本品具有毒性和腐蚀性。使用本品应穿戴防护物品。如果不小心接触，应立即用大量水冲洗并前往医院治疗。
产品介绍：
本本品是广谱型总RNA提取试剂。本品适用范围广泛，可以从动物组织、植物材料、微生物及细胞等样品中提取总RNA。本品对组织(小量：50-100mg或者大量：≥1g)或者细胞(小量：5 x 106个或者大量≥107个)均有良好分离效果。EasyZol在样品充分裂解后能保护RNA完整性，提取后的RNA可用于各种分子生物学实验，如RT-qPCR(新贝生物 #R201、 #R202、 #Q204)。
产品组成：
| 组分 | TQ102-01 |
| EasyZol Reagent | 100 mL |
注意事项：
1. 样品用EasyZol裂解或者匀浆后，置于负70℃可放置一个月以上。RNA容易降解，建议提取后尽快进行后续实验。
2. 自备试剂：氯仿、异丙醇(新开封或提取RNA专用)、75%乙醇(DEPC水配置)、RNase Free water。
3. 自备仪器、耗材：冷冻离心机(4℃)、离心管、移液器
产品使用：
A.样品裂解
1.1 植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或者将植物组织剪碎后直接在EasyZol中迅速研磨。每30-100mg组织加1mLEasyZol，一般样品体积不要超过EasyZol体积的1/10。
1.2 动物组织：取新鲜或者负70℃冻存的动物组织尽量剪碎，每30-100mg组织加1mL EasyZol，匀浆仪进行匀浆处理(冰上)。或者在液氮中研磨后加入1mL EasyZol混匀。一般样品体积不要超过EasyZol体积的1/10。
1.3 单层培养细胞：尽量去除培养板上的培养液，按照10cm2培养板面积加入1mL的比例加入EasyZol后，反复吹打裂解细胞。（当EasyZol量不足可导致提取的RNA有DNA污染）
1.4 细胞悬液：离心收集细胞。每(5-10)x106的动物细胞、植物细胞、酵母细胞或者每1x107细菌加1mLEasyZol后，用移液器反复吹打来裂解细胞。破裂某些酵母或者细菌可能需要使用匀浆器。
B.室温放置
2. 匀浆后样品剧烈震荡后在室温放置5分钟以使核蛋白完全解离。
3. 可选步骤：4℃，12000rpm离心10分钟去除杂质，取上清。(如果样品中含有较多蛋白质、脂肪、多糖、肌肉、块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀包含细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清含有RNA。处理脂肪组织样品，可去除上层大量油脂)
C.加氯仿，4℃离心
4. 每1mLEasyZol加0.2mL氯仿，盖紧管盖，剧烈震荡15秒并在室温下放置3分钟。
5. 4℃，12000rpm离心15分钟离心后分三层：下层红色有机苯酚氯仿层，中间层，上层无色的水样层(RNA)。上层体积大约为所加的EasyZol体积的50-60%。(下层和中间层是蛋白和DNA，也可提取)
D.加异丙醇，4℃离心
6. 将上层转移到新的离心管(剪枪头，取60%-70%上层体积，避免扰动中间层)，加入等体积异丙醇，颠倒混匀后室温放置10分钟。
7. 4℃，12000rpm离心10分钟离心，弃上清。(RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后在管侧壁或者管底形成胶状沉淀)
E.加75%乙醇，4℃离心
8. 加入1mL 75%乙醇洗涤沉淀。
9. 4℃，12000rpm离心5分钟，弃上清。(注意不要弄丢RNA沉淀，剩余少量液体可用移液器缓慢吸出)
F.晾干，溶解RNA
10. 室温晾干3分钟、加入30-100μL RNase free water，充分溶解RNA，溶解后的RNA立即用于下游实验或保存在负70℃。沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。
