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2 x BlueTrack Universal SYBR qPCR Mix
货 号:Q488
保存条件:- 20 ℃避光长期储存;4℃避光存放6个月
产品介绍:
本品为SYBR Green I 染料法蓝色qPCR预混液,便于可视加样,配合红色逆转录试剂盒(EnzyArtisan,货号R366)或者黄色cDNA稀释液(EnzyArtisan,货号Q100),可以实现cDNA模板加入蓝色qPCR预混液变色,从而为正确移液提供清晰的指示。该预混液包含qPCR所需的酶、dNTP、缓冲液、荧光染料、参比染料等组分,使用时只需加入模板、引物、水即可。其中本品所使用的聚合酶采用了PolyLock热启动技术,较之抗体封闭、化学修饰等热启动方式具有封闭效率高,酶活释放快的优势。搭配针对qPCR精心优化的缓冲体系,该预混液具有灵敏度高,特异性强、定量范围广、重复性好的特点。另外本品预混了特殊的ROX参比染料,可兼容所有qPCR仪器,无需针对不同仪器额外添加相应的ROX。
产品组成:
组分
| Q488-01 | Q488-05 |
2× BlueTrack Universal SYBR qPCR Mix | 4 x 1.25 mL | 20 x 1.25 mL |
DNase free H2O | 3 x 1.5 mL | 15 x 1.5 mL |
温馨提示:
· 本品已预混适用所有qPCR仪器的ROX参比染料,无需额外添加ROX;
· 若解冻后管底出现沉淀(保护剂),请颠倒混匀确保沉淀完全溶解后使用;
· 本品含有荧光染料SYBR Green I,使用和存储时请避免强光照射;
产品使用
A.推荐体系
2 × BlueTrack Universal SYBR qPCR Mix 在冰上解冻后,混匀,按如下顺序加样:
| 20 μL 体系
| 10 μL体系 |
2 x BlueTrack Universal SYBR qPCR mix | 10 μL | 5 μL |
Primer-F (10 μM) | 0.4 μL | 0.2 μL |
Primer-R (10 μM) | 0.4 μL | 0.2 μL |
Template | x μL | x μL |
DNase free H2O
| 补足至 20 μL
| 补足至 10 μL |
注:引物和模板使用量请根据需要调整,引物的终浓度范围在0.1-1 μM,通常引物的使用量增加可以提高灵敏度(Ct减小)但同时会降低特异性(出现引物二聚体等非特异性产物);未稀释的cDNA的加入量不应超过总反应体积的1/10;使用DNA作模板时,请勿加入过量DNA(<500ng)以免产生背景信号。
B.推荐程序
注:预变性温度和时间可以根据模板复杂度进行调整,如模板复杂度较高可以提高预变性温度并延长时间;对于长度小于200bp的扩增子,可以使用快速程序,即变性时间3秒,退火和延伸时间10秒;对于长度大于200bp的扩增子,请延长退火和延伸时间至30秒。对于高GC的扩增子,可提高退火延伸温度至65℃;循环数设置为40-45可满足绝大多数的反应;对于Tm较低的引物,可使用三步法,比如退火温度设置在55℃,延伸温度设置为72℃,信号采集设置在延伸步骤。
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货号
| 名称
|
R202
| HyperScript III RT SuperMix for qPCR with gDNA Remover |
R366
| HyperScript RedTrack RT SuperMix for qPCR |