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2×Universal-Annealing Speeding Hot-Start PCR MasterMix(GreenDye Plus)
货 号：U418
保存条件：- 20 ℃
案例
产品介绍：
本品含有U400 DNA Polymerase、dNTPs、Mg2+离子、绿色电泳指示剂和缓冲体系。U400 DNA Polymerase添加了在常温下能够抑制其5'→3'聚合酶活性的化合物组合，可进行热启动PCR，可室温混样。此外U400 DNA Polymerase是基于AI蛋白质突变平台Protein-Evo-Pro筛选出的新一代聚合酶，具有广泛引物Tm兼容性即60℃完成大部分引物的退火（60℃作为PCR退火温度），展现出优异的成功率和特异性。使用过程中PCR体系里面只需加入模板、引物和水即可。本产品含有电泳指示剂，可在PCR反应完成后直接点样进行电泳。
产品组成：
| 组分 | U418-02 | U418-03 |
| 2×Universal-Annealing Speeding Hot-Start PCR MasterMix(GreenDye Plus) | 5 × 1 mL | 10 × 1 mL |
| DNase free H2O | 4 × 1.25 mL | 8 × 1.25 mL |
| DNA 模板稀释液（Low TE Buffer） | 1 mL | 1 mL |
产品特点：
通用退火·使用60℃作为PCR退火温度可以实现优异的成功率和特异性，省去退火温度优化步骤；
快速扩增·10秒变性，10秒退火，15秒/kb延伸，2kb以内片段1小时完成扩增；
热启动·特殊化合物确保了全过程热启动，可室温配制PCR体系；
多重PCR·标准体系和标准程序可以实现多重PCR；
粗品直扩·本品可以实现血液、叶片、酵母、细菌、细胞等直接作为模板扩增；
产品使用
推荐体系
2×Universal-Annealing Speeding Hot-Start PCR MasterMix(GreenDye Plus) 在冰上或者室温依次加入以下组分（推荐使用50μL体系,避免小体积移液器难以操作和PCR过程中小体积挥发,也可几份体系一起做预混液，避免单个组分小体积加样）：
| DNase free H2O | 补足至 50※ μL
| 补足至 20※ μL |
| 2×Universal-Annealing Speeding Hot-Start PCR MasterMix(GreenDye Plus) | 25 μL
| 10 μL |
| 上游引物（10 μM） | 2 μL | 0.8 μL |
| 下游引物（10 μM） | 2 μL | 0.8 μL |
| 模板 | X* μL | X* μL |
Total
| 50 μL | 20 μL |
※ 可以等比例降低体系体积，但不要小于20 μL。
* 加入模板量一般基因组10 - 100 ng，病毒或者质粒0.1 - 10 ng，cDNA 1-5μL (未稀释cDNA体积不要超过体系的1/10体积)；
原则上加入的有效的模板摩尔数在10⁵个左右。
B.推荐程序
*退火温度设置：
1.一般情况下退火温度请使用60℃；
2.当上下游引物中的一条引物的Tm值≤50℃或两条引物的Tm均≤50℃，可以尝试55℃作为退火温度（特别是已经尝试了60℃退火温度不满意情况）；
3.在退火温度需要额外优化的情况下，建议进行梯度PCR摸索最优退火温度；
#循环内延伸时间设置：
1.多种长度的片段在一个PCR仪里面运行，以最长的片段的延伸时间为准；
†循环数设置：
1.多重PCR请设置为25个循环（注意模板投入量不能太少），循环数过多可能会影响扩增均一性；
