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HyperScriptTM III 1st Strand cDNA SynthesisKit with gDNA Remover
货 号：R201
保存条件：- 20 ℃长期储存
产品介绍：
本品为以RNA为模板合成1st Strand cDNA 的试剂盒，包含gDNA去除和逆转录两个部分。通过使用不同的逆转录引物本试剂盒既可以合成全长cDNA用于克隆，又可以合成高度均一的cDNA用于qPCR定量。gDNAremover可以快速去除RNA样本中残留的基因组DNA，而其活性被随后加入组分抑制，保证了新合成的cDNA不被降解。试剂盒所使用的逆转录酶是基于M-MLV定向进化而来的新一代逆转录酶，具有更低的RNase H活性、更高的热稳定性和cDNA合成效率，搭配为其优化的最适buffer，可以获得15k以上的全长cDNA。
产品组成：
温馨提示：
·5x RT Mix 若出现白色沉淀，请颠倒混匀确保沉淀完全溶解后使用。
·为保证实验成功率和准确性，请勿使用过度降解的RNA。
·配置反应液时，请使用RNase-free枪头、Microtube等。
·若后续为定量PCR(qPCR)，逆转录15 min；若后续为克隆实验，逆转录45 min。
产品使用：
1.RNA热变性（可选,5kb以上片段克隆为必须步骤）
请配置如下反应液：
70℃处理5min后立即冰浴2min。
注：热变性处理RNA，可以打开RNA的高级结构，有利于后续逆转录反应。若后续实验为PCR，且目的片段大于5k，不可省略该步骤。如果加入的为mRNA：10 pg - 500 ng。
2.gDNA去除体系配置及反应程序
若选择步骤1，在上述混合液中加入2 μL 5 × gDNA remover 混匀后42℃ 2min；
若省略步骤1，请配置如下反应液，混匀后42℃ 2 min。
3.配置逆转录反应体系
请配置如下反应液：
注：1. 后续实验为克隆实验，若RNA来源于真核生物，只需使用Oligo (dT)20VN即可，加入Random Primers会降低全长cDNA的产量；
若RNA来源于原核生物，只需使用Random Primers 或基因特异性引物(2pmol)。
2. 后续实验为qPCR，请同时加入Oligo(dT)20VN和Random Primers以获得在mRNA不同位置逆转录效率均一的cDNA。
4.逆转录反应程序
请按如下条件进行逆转录反应：
注：1. 25℃ 5min有助于Random Primers与RNA结合，若不使用Random Primers该步骤可省略。
2. 若后续实验为克隆实验，逆转录45min即可产生最大量的全长cDNA；若后续实验为qPCR，逆转录15min即可。
3. HyperScriptTM III 在37-60℃均有较强活性，37℃即可满足绝大多数实验；若目标RNA区域有高GC部分，可提高逆转录温度至50℃。
4. 85℃ 5s 可以失活逆转录酶和gDNA remover，请勿省略该步骤。
逆转录产物可直接用于下游实验，也可置于4℃短暂放置，3-6个月内-20℃保存，长期存放请置于-80℃冰箱，cDNA小份分装避免反复冻融。
常见问题及解决方案：
本品仅供科研使用，不能用于人和动物医疗诊断
