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HyperPure RNA Isolation Kit
货 号:TQ301
保存条件:室温保存
产品介绍:
本品可快速从106-107培养细胞或者从10mg-20mg动物组织提取总RNA(miRNA除外,脂肪组织除外),本品采用特殊配方无需酚氯仿抽提,试剂盒中HyperPure gDNA-Filter Columns能有效地去除杂质和gDNA,HyperPure RNA Columns能高效地结合RNA,搭配优化后的Buffer,得到的总RNA纯度高。所得的RNA可用于PCR(货号R201、T202、G302),qPCR(货号R202、
Q204)等实验。
产品组成:
组分 | TQ301-01 (50次) |
Lysis Buffer(裂解缓冲液) | 30 mL |
Wash Buffer A(清洗液) | 40 mL |
Wash Buffer B*(清洗液,首次使用要加无水乙醇) | 20 mL |
Elution Water*(洗脱液) | 10 mL |
HyperPure gDNA-Filter Columns & collection tubes(DNA吸附柱和收集管套件) | 50套 |
HyperPure RNA Columns & collection tubes(RNA吸附柱和收集管套件) | 50套 |
RNase Free Tubes(1.5 mL无RNA酶离心管,用于裂解样本和最后一步洗脱使用) | 100个 |
Wash Buffer B*首次使用加80ml无水乙醇,Elution Water*推荐存放在4℃或者-20℃。
注意事项:
Wash Buffer B首次使用加80ml无水乙醇。
尽量使用新鲜样本,以保证RNA不被降解。样本不要使用过多过大,否则可能堵塞Columns。
本说明书推荐的最适细胞量能满足大部分样本,对于核酸含量过高或者过低样本,可酌情减少或者增加起始样本量。
提取过程在室温进行,试剂不可冷冻(如有沉淀37℃加热溶解),以免产生沉淀堵塞纯化柱,最后得到的RNA要分装冷冻保存。
产品使用:
1.1裂解细胞:不同培养器皿对应的细胞量如下图,其他类型器皿按照面积计算估计细胞量:
培养器皿 | 单孔面积/cm2 | 细胞量 |
12孔培养板 | 4.5 | 1 × 106 |
6孔培养板 | 9.6 | 2.5 × 106 |
3.5 cm 培养皿 | 8 | 2 × 106 |
6 cm 培养皿 | 21 | 5.2 × 106 |
25 cm2 培养瓶 | 25 | 5 × 106 |
吸净培养器皿里的培养液,按照106-107细胞量加入500μl Lysis Buffer,用移液器反复吹打(或者细胞刮刀刮下细胞),直至细胞全部脱落,转移到1.5ml RNase Free Tubes,充分颠倒混匀10次,静置5分钟。
a. 此步骤也可用胰酶消化贴壁细胞8000rpm离心2分钟后,加入500μl Lysis Buffer后续操作如上。
b. 悬浮细胞收集8000rpm离心2分钟后,加入500μl Lysis Buffer后续操作如上。
c. 如果样本不立即提取需要保存,可以在上述细胞加500μl Lysis Buffer充分裂解之后(细胞内也有RNase酶,所以要裂解充分,利于Lysis Buffer抑制RNase
酶),保存到-80℃冰箱
1.2 裂解组织:
可选一:液氮研磨
将10mg-20mg(10mg组织约等于米粒大小)样本转移至液氮预冷的研钵中,用研磨杵研磨样本(研磨中不断补加液氮),直至研磨成粉末状,无明显颗粒。粉末转移到1.5ml RNase Free Tubes加入500μl Lysis Buffer,高速涡旋30秒,室温静置5分钟,12000rpm室温离心5分钟,保留上清。
可选二:研磨棒或者组织研磨仪
将每10mg-20mg(10mg组织约等于米粒大小)加500μl Lysis Buffer,用研磨棒或组织研磨仪研磨(注意温度),直至样本充分裂解,高速涡旋30秒,室温静置5分钟,12000rpm室温离心5分钟,保留上清。
2 去除基因组/杂质:将上一步上清转移到HyperPure gDNA-Filter Columns & collection tubes,12000rpm室温离心2分钟,丢弃柱子,保留液体(注意)。
3 加乙醇:加上一步液体0.5倍体积无水乙醇(约250ul)到上一步液体中,用移液器吹打5次混匀。
4 RNA结合:将上一步混合液(若体积大于750ul,分几次重复此步骤)转移到HyperPure RNA Columns & collection tubes,12000rpm室温离心30秒,弃滤液,装回柱子到收集管中。
5.1 清洗:加入Wash Buffer A 500ul到柱子上,12000rpm室温离心30秒,弃滤液,装回柱子到收集管中。
5.2 清洗:加入Wash Buffer B 500ul到柱子上,12000rpm室温离心30秒,弃滤液,装回柱子到收集管中。
5.3 清洗:加入Wash Buffer B 500ul到柱子上,12000rpm室温离心30秒,弃滤液,装回柱子到收集管中。
6 甩干乙醇:不加液体,空离,12000rpm室温离心2分钟。
7 RNA洗脱:将上面的HyperPure RNA Columns小心转移(重要,不要碰到管内液体)到新的1.5ml RNase Free Tubes,在膜中央(重要)加入50ul-100ul Elution Water,室温静置3分钟,12000rpm室温离心1分钟,得到的RNA立即使用货号#R202/R201#逆转录,或者小份分装RNA保存在负80度冰箱。
本品仅供科研使用,不能用于人和动物医疗诊断